Mérites extraordinaires de l’ELISA ultrasensible avec cycle thio-NAD dans la détermination de la protéine NS1 de la dengue

1. Présentation

La dengue est une maladie infectieuse aiguë causée par la Virus de la denguepar la piqûre d’un moustique infecté de l’espèce Aedes (Ae. aegypti ou Ae. albopictus), avec les principaux symptômes tels qu’une forte fièvre, des étourdissements, des maux de tête, des éruptions cutanées et Forte douleurdouleurs (douleurs oculaires, musculaires, articulaires ou osseuses), etc. Cette maladie est largement répandue dans les climats tropicaux et subtropicaux. On estime que 100 à 400 millions de personnes sont infectées chaque année, dont plus de 80 % sont généralement bénignes et asymptomatiques. Néanmoins, la dengue sévère peut augmenter le risque de décès si elle n’est pas traitée correctement. Ainsi, le diagnostic précoce de cette maladie est important pour son traitement rapide.

Il est à noter que la protéine non structurale 1 (NS1), une glycoprotéine hautement conservée, est principalement sécrétée lors de l’infection de Dengue virus, qui est considéré de manière intensive comme le principal facteur de pathogenèse de la Dengue. Par conséquent, l’INS est généralement utilisé comme biomarqueur pour la détection précoce de cette maladie.

Dans cette étude, un test immuno-enzymatique sandwich(TEST ELISA)en combinaison avec le thio-nicotinamide adénine dinucléotide (thio-NAD/S-NAD) méthode de cyclage (ci-après dénommé ELISA ultrasensible) est utilisée pour détecter les INS, suivie d’une comparaison avec le TAAN pour confirmer l’exactitude de la détection.

2. Avantages et inconvénients des méthodes de détection traditionnelles pour Dengue 

À l’heure actuelle, lVoici quatre principales méthodes de détection pour Dengue.


L’isolement et l’identification virales ont une spécificité élevée mais prennent du temps, prenant au moins 5 jours. Le test antigénique rapide est la méthode la plus rapide et la plus rentable parmi les autres méthodes, mais sa sensibilité et sa spécificité sont relativement faibles. Les tests sérologiques basés sur les IgM et les IgG sont limités par le nombre de jours d’infection, car le Le test doit être retardé jusqu’à ce que le taux d’anticorps atteigne un niveau détectable.

En clinique, on applique souvent le TAAN pour déterminer Denguepar la saleté de sa grande sensibilité et spécificité. Cependant, cette méthode est coûteuse, laborieuse et sujette à une fausse positivité, qui doit être menée par le personnel formé. Pour pallier les inconvénients de ces méthodes, une nouvelle méthode de détection l’ELISA ultrasensible est appliqué dans cette étude.

3. Flux de travail d’ELISA ultrasensible avec cycle thio-NAD

Une paire d’anticorps estutilisé pour capturer la protéine NS1 dans le sandwich ELISA et la phosphatase alcaline estmarqué sur l’anticorps secondaire. Outre les anticorps, un dérivé de l’androstérone, la 3α-hydroxystéroïde déshydrogénase, la thio-NAD et le NADH areutilisé pour construire le système de cycle enzymatique thio-NAD. Au cours de la réaction cyclique du thio-NAD, le thio-NADH s’accumule constamment en nombre triangulaire et peut être mesuré directement à une absorbance de 405 nm.

4. La comparaison de l’ELISA ultrasensible et du TAAN dans la détection de la protéine NS1 de la dengue

Dans le TAAN, 60 échantillons sont positifs pour la dengue et 25 sont négatifs pour la dengue. La valeur du seuil de cycle (CT) NAAT des échantillons positifs pour la dengue variait de 12,42 à 31,41. Dans l’ELISA ultrasensible, 59 échantillons sont positifs aux résultats du TAAN, tandis que 25 échantillons sont complètement négatifs aux résultats du TAAN.

Comparativement au TAAN, la sensibilité et la spécificité de l’ELISA ultrasensible sont de 98,3 % et de 100 %, respectivement (tableau 2). Sur 60 échantillons de patients positifs pour la dengue confirmés par le TAAN, seul 1 échantillon est négatif dans l’ELISA ultrasensible. Les données du TAAN ont montré qu’il s’agit d’un cas d’infection à DENV de type 4 avec une valeur CT de 21,59. Les résultats de l’ELISA ultrasensible sont en accord presque parfait avec les résultats du TAAN, avec une valeur kappa de 0,972 (IC à 95 % : 0,917-1.0).

5. En conclusion

La méthode ELISA ultrasensible est facile à réaliser et ne nécessite aucun stagiaire professionnel pour fonctionner. La détection peut être lancée immédiatement après la réception d’un petit échantillon. Il est particulièrement adapté à la détection précoce de la dengue dans les pays à faible revenu.

Référence

Chen, Po-Kai et al. « Méthode de détection avancée de la protéine NS1 de la dengue à l’aide d’un ELISA ultrasensible avec cycle thio-NAD. » Virus, vol. 15,9, 1894. 8 sept. 2023, doi :10.3390/v15091894

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