Une méthode scientifique pour quantifier le NMN dans des échantillons biologiques
1. Introduction
Supplémentation deMononucléotide de nicotinamide (NMN)pour augmenter la régulationniveau deDinucléotide d’adénine nicotinamide (NAD+)a été dévoilé comme une intervention prometteuse contre le vieillissement. Cependant, il reste un défi sérieux pour être précisquantifier les intermédiaires NAD+, NMN en particulier. Cette étude est propulsée par l’introduction d’une méthode novatrice, la méthodologie LC-MS/MS à double isotope (dimeLC-MS/MS), pour la quantification précise deNMN dans des échantillons biologiques.2. Facteurs affectant la détection précise des NMN
Le NMN est difficile à détecter avec précision en raison de sa vulnérabilité aux enzymesdégradation, conversion dans le traitement des échantillons, ses comportements complexes dans différentes colonnes et conditions d’extraction, ainsi que l’effet matriciel.
Plus précisément, le NMN possède les propriétés de haute polarité et de faible volatilité, qui est facile à dissoudre dans l’eau mais difficile à dissoudre dans les solvants organiques. Ces propriétés restreignent fortement l’application de nombreuses méthodes d’analyse quantitative conventionnelles.
BÉchantillons iologiquescomme Le sang porte des activités significatives de CD38 et CD73 (ecto-5’-nucléotidase), qui pourraient toutes deux utiliser le NMN comme substrat.
Le comportement du NMN dans la colonne est très complexe, probablement en raison de la nature bipartite de ses charges, de sorte que des différences subtiles dans les conditions d’extraction et de colonne affectent significativement la détection fiable et précise du NMN.
3. Stratégies d’adaptation dedimeLC-MS/MS pour réduire l’impact des facteurs d’impact
Pour éviter l’interférence des facteurs mentionnés ci-dessus, un pRototypeColonneNMN-2 est appliqué. Cette colonnecontiennents Particules de silice à haute pureté à base de C18 qui sont plus capables de lier les composés hydrophiles que les particules de carbone, améliorant ainsi la capacité de séparation.PAcide erchlorique (ACP) est employée puisqu’elle peut extraire efficacement NAD+ et NMN provenant d’échantillons biologiques tels que le plasma avec un minimum Des défaites.
Pour ajuster les effets matriciels,a quantité fixe (1 μM) de chacun Composé isotopiqueis ajoutés àbiologique Échantillons avant l’extraction PCA.
4. L’avantages de dimeLC-MS/MS
Dnormes NMN isotopiques oubles, NMN (M + 14) et NMN (M + 5), dans la méthodologie pilotée par LC-MS/MS, peuvent retracer précisément le sort du NMN lors du traitement des échantillons, quiAugmente significativement la précision et la fiabilité de la mesure des NMN dans les échantillons biologiques. De plus, le dimeLC-MS/MS peut évaluer l’efficacité d’extraction et les concentrations absolues de NMN dans différents types d’échantillons biologiques.
5. Conclusion
Thest nouveau LC-MS/MS-méthodologie pilotée avec des normes NMN à double isotopie peut Accurately et Reliably mesurer le NMN dans des échantillons biologiques. Il pourra être utilisé pour de futures études sur la consommation de NMN.6. Référence
Unknow, Junya et al. « Quantification absolue du mononucléotide de nicotinamide dans des échantillons biologiques par chromatographie liquide à double isotope - spectrométrie de masse tandem (dimeLC-MS/MS). » NPJ AGING VOL. 10,1 2. 2 janv. 2024, doi :10.1038/s41514-023-00133-1Pourquoi choisirBONTAC?
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