Avantages extraordinaires de l’ELISA ultrasensible avec le cycle de thio-NAD dans la détermination de la protéine NS1 de la dengue
1. Introduction
La dengue est une maladie infectieuse aiguë causée par leVirus de la dengue par la piqûre d’un moustique d’une espèce d’Aedes infectée (Ae. aegypti ou Ae. albopictus),avec les principaux symptômes tels que forte fièvre, vertiges, maux de tête, éruption cutanée etsévère douleurs (douleurs aux yeux, muscles, articulations ou os), etc. Cette maladie est largement répandue dans les climats tropicaux et subtropicaux. On estime que 100 à 400 millions de personnes sont infectées chaque année, dont plus de 80 % sont généralement bénignes et asymptomatiques. Néanmoins, une dengue sévère peut augmenter le risque de décès si elle n’est pas traitée correctement. Ainsi, un diagnostic précoce de cette maladie est essentiel à son traitement rapide.Notamment, la protéine non structurale 1 (NS1), une glycoprotéine hautement conservée, est principalement sécrétée lors de l’infection deDenguevirus, qui est intensivement considéré comme le principal facteur de pathogénie deDengue. Ainsi, l’INS est généralement utilisé comme biomarqueur pour la détection précoce de cette maladie.
Dans cette étude, un test immunosorbent lié à une enzyme sandwich (ELISA) en combinaison avec leThio nicotinamide adénine Dinucléotide (thio-NAD/S-NAD)Méthode de cyclage (ci-après appelé ELISA ultrasensible) est utilisé pour détecter les INS, suivi d’une comparaison avec le NAAT pour confirmer sa précision de détection.
2. Avantages et inconvénients des méthodes traditionnelles de détection pourDengue
Actuellement, tVoici quatre principales méthodes de détectionpour Dengue.
Isolement viral et l’identification sont très spécifiques mais prennent du temps, prenant au moins 5 jours. Le Antigène rapide Le test est la méthode la plus rapide et la plus économique parmi les autres, mais la sensibilité et la spécificité sont relativement faibles. Le test sérologique basé sur l’IgM et l’IgG est limité par le nombre de jours d’infection, commeleLe test doit être retardé jusqu’à ce que le niveau des anticorps soit atteint atteint un niveau détectable.
En clinique, la NAAT est souvent appliquée pour déterminerDengue par la saleté de sa grande sensibilité et spécificité. Cependant, cette méthode est coûteuse, laborieuse et sujette à la fausse positivité, qui doit être pratiquée par le personnel formé.Pour surmonter les inconvénients de ces méthodes, une nouvelle méthode de détectionELISA ultrasensible est Appliqué dans cette étude.
3. Flux de travail d’ELISA ultrasensible avec le cycle thio-NAD
Une paire d’anticorpsest utilisé pour capturer la protéine NS1 dans le sandwich ELISA et la phosphatase alcalineest marqués sur l’anticorps secondaire. Outre les anticorps, un dérivé d’androstérone, le 3α-hydroxystéroïde déshydrogénase, la thio-NAD et le NADHsont utilisé pour construire le système de cycle enzymatique thio-NAD. Pendant la réaction de cycle thio-NAD, la thio-NADH s’accumulait constamment sous forme de nombre triangulaire et pouvait être mesurée directement à une absorption de 405 nm.
4. La comparaison de l’ELISA ultrasensible et de la NAAT dans la détection de la protéine NS1 de la dengue
Dans le NAAT, 60 échantillons sont positifs à la dengue et 25 sont négatifs à la dengue. La valeur du seuil de cycle (CT) de ces spécimens à la dengue positive variait de 12,42 à 31,41.Dans l’ELISA ultrasensible, 59 échantillons sont correspondants positifs aux résultats NAAT, tandis que 25 échantillons sont complètement négatifs aux résultats NAAT.Comparé à la NAAT, la sensibilité et la spécificité de l’ELISA ultrasensible sont respectivement de 98,3 % et 100 % (Tableau 2). Sur 60 échantillons de patients positifs à la dengue confirmés par la NAAT, un seul échantillon est négatif dans l’ELISA ultrasensible. Les données du NAAT ont montré que le scolin est un cas d’infection de type 4 par DENV avec une valeur de CT de 21,59. Les résultats de l’ELISA ultrasensible sont presque parfaitement en accord avec les résultats de l’NAAT, avec une valeur kappa de 0,972 (IC 95 % : 0,917-1.0).
5. Conclusion
ULa méthode ELISA Itrasensitive est facile à réaliser et ne nécessite aucun stagiaire professionnel pour fonctionner. TLa détection peut être lancée immédiatement après avoir reçu un petit échantillon. Il est particulièrement adapté à la détection précoce deDenguemaladie dans Pays à faible revenu.Référence
Chen, Po-Kai et al. « Méthode avancée de détection de la protéine NS1 de la dengue utilisant un ELISA ultrasensible avec cycle de thio-NAD. » Viruses, vol. 15,9, 1894. 8 sept. 2023, doi :10.3390/v15091894Avantages du produit et caractéristiques deBONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC est ol’une des rares entreprises dansChine qui peut produire du Thio-NAD, avec« Bonzyme » Méthode enzymatique entière (Respectueux de l’environnement; Aucun résidu de solvant nocif) et technologie unique de purification « Bonpure » en sept étapes. BONTAC intègre la R&D, la production et la vente, avec des usines indépendantes et de nombreuses certifications internationales garantissant une qualité élevée et un approvisionnement stable en produits.
